Суспензия клеток

Самый полный справочник по болезням сельскохозяйственных животных
Условные обозначения:
Free Content - Интересное
New Content - Новое
Open Access Content - Старое
Subscribed Content - Полезное
Free Trial Content - Важное

Донорами вируса были коровы, спонтанно больные лейко­зом и находившиеся под регулярным клинико-гематологическим наблюдением в течение 6—7 лет. Культуры лимфоцитов приготов­ляли по ранее описанному нами методу (А. Ф. Валихов с соавт., 1974). В качестве антикоагулянта крови использовали динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) в концентрации 2 мг на 1 мл крови.

Лимфоциты выделяли путем лизирования эритроцитов; клетки после не­скольких циклов промывки физиологическим раствором переносили в среду Игла, содержащую 10% сыворотки крупного рогатого скота; 10 ЕД/мл пени­циллина; 100 мкг/мл стрептомицина и 0,01 мг/мл фитогемагглютинина П.

Суспензию клеток, в концентрации 10Х108 в 1 мл, инкубировали при 37° в течение 48—72 часов. Затем культуру центрифугировали при 2500g в течение 30 минут с целью удаления клеток и крупного детрита. Вирус из культуральной жидкости преципитировали 8%-ным раствором полиэтиленгликоля с молеку­лярным весом 20 000. Смесь оставляли в течение 2—12 часов на холоде при по­стоянном помешивании. После этого преципитат отделяли путем центрифуги­рования смеси при 5500g в течение 60 минут и ресуспендирования в буфере (0.01 М трис-НС1, 0,1 М хлористый натрий, 0,001 М ЭДТА, рН 7,2). Суспензию наслаивали на ступенчатый градиент сахарозы в этом же буфере и центрифуги­ровали 60 минут при 100 000g. Зону опалесцирующей суспензии, сформиро­вавшуюся над 40%-ным раствором сахарозы, отсасывали, разбавляли в 10 раз буфером и переосаждали повторным центрифугированием. Из полученного осадка приготовляли ультратонкие срезы и исследовали их в электронном мик­роскопе на наличие вируса типа С.

 

Условные обозначения:
Free Content - Интересное
New Content - Новое
Open Access Content - Старое
Subscribed Content - Полезное
Free Trial Content - Важное
Сообщить информацию с помощью: Эти иконки ведут на различные социальные сервисы
Карточка
Настройки
Не зарегистрирвоаны?
войти
Text size: A | A | A | A